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Abstract :
[fr] Les Isomaltooligosaccharides (IMO) sont constitués de monomères de glucose liés par au moins une liaison α-1-6 (IMO classique), ou dans une moindre proportion α -1-3 (famille nigero-) ou α -1-2 (famille koji-). Ils sont produits par voie enzymatique à partir d’amidon de céréales hydrolysé. Un mélange très complexe est obtenu avec des molécules caractérisées à la fois par leur valeur de DP (de 2 à ~15), le type de liaisons en présence ainsi que la proportion et la position de chaque type de liaison (seules α -1-6 ou en combinaison). Le défi de cette étude est de trouver une méthode qualitative et quantitative pour caractériser ces sirops. Trois différentes méthodes ont été testées à l’aide de trois différents types de détecteur et comparées selon des critères de sélectivité, sensibilité, robustesse, applicabilité et de la faisabilité de l’analyse quantitative
L’HPLC-RID (Refractive Index Detector) utilisée avec une colonne Prevail Carbohydrate (Alltech), adaptée aux sucres de DP variables, s’est révélée être peu sélective du fait de l’obligation de travailler en conditions isocratiques.
L’HPLC-ELSD (Evaporating Light Scattering Detector) permettant de travailler en gradient d’élution, une très bonne séparation des différents DP est obtenue sur la même colonne ainsi qu’une séparation des différents DP2 et une amélioration de la sensibilité. L’analyse quantitative reste plus délicate du fait de la zone relativement limitée de linéarité.
La Chromatographie à Echange d’Anion et à Haute performance couplée à la Détection à Amperometrie Pulsée (HPAEC-PAD), une séparation hautement sélective et une détection très sensible. Elle est une des seules méthode capable de séparer des molécules homologues ayant comme seules différences leur DP ou de leur type et la séquence de leurs liaisons. L’analyse quantitative a fait l’objet d’une étude approfondie, les facteur de réponses étant dépendant de la structure, du DP et du type de liaisons des oligosaccharides.
