Mise au point d'une forme stable de l'allergène Der p 3 de Dermatophagoides pteronyssinus pour le diagnostic rapide et le développement de nouvelles approches d'immunothérapie de l'allergie aux acariens

L’allergie aux acariens touche 20 à 30 % de la population occidentale. L’allergène Der p 3 de l’acarien Dermatophagoides pteronyssinus est une protéase à serine active appartenant à la famille de la trypsine. Son activité protéolytique pourrait être un facteur adjuvant impliqué dans le développement et la chronicité de l’allergie. A l’heure actuelle, l’implication de Der p 3 dans l’allergie est peu connue et son taux de fixation des IgE provenant de patients allergiques est controversé. Cependant, ces différentes études ont été réalisées au moyen d’un allergène naturel très sujet à l’autolyse et pouvant être contaminé par d’autres protéase.
Durant la première partie de cette étude, nous avons pu montrer que rDer p 3 produit en P.Pastoris présente les mêmes propriétés allergéniques que nDer p 3. En effet, les résultats obtenus par test ELISA, inhibition compétitive montrent que rDer p 3 est correctement replié et présente les mêmes épitopes B conformationnels que l’allergène naturel.
Dans la deuxième partie de cette thèse, nous avons pu mettre en évidence que l’autolyse de Der p 3 durant le test ELISA a un effet sur la reconnaissance des IgE. En effet, le taux mesuré avec la forme inactive est deux fois supérieur par rapport à la forme active. Der p 3S196A pourrait être donc un meilleur outil de diagnostic pour l’allergie à Der p 3.
Dans la troisième partie de cette thèse, nous avons pu montrer que le propeptide de proDer p 3 affecte l’allergénicité de Der p 3. Par une étude in vitro, nous avons prouvé par ELISA, par les tests de dégranulation des basophiles de rat humanisés et d’activation des basophiles humains, que proDer p 3 est moins bien reconnu par les IgE de patients allergiques que la forme mature Der p 3. Ensuite, nous avons montré que les souris sensibilisées par les formes mature et zymogène de l’allergène Der p 3 ont développé une réponse immune de type TH2 et TH1 respectivement. ProDer p 3 pourrait donc être considéré comme une forme hypoallergénique de l’allergène Der p 3.
Dans la dernière partie, nous avons construit un modèle tridimensionnel de l’allergène Der p 3 afin de prédire les épitopes B conformationnels par approche bioinformatique. En effet, 3 épitopes B ont été prédits ainsi que les acides aminés impliqués dans la reconnaissance et la fixation des IgE au sein de chaque épitope. Enfin, au moyen de la technique du peptide array, nous avons pu mettre en évidence un épitope B linéaire de l’allergène Der p 3.