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Utilidad de la prueba de PCR para el diagnóstico rápido de los Herpes Virus Equinos tipo 1 y 4 en forma combinada
Álvarez, I.; Craig, M.I.; Rodriguez, Sabrina et al.
2004XV Reunión Científico Técnica AAVLD
 

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Abstract :
[es] UTILIDAD DE LA PRUEBA DE PCR PARA EL DIAGNOSTICO RAPIDO DE LOS HERPES VIRUS EQUINOS TIPO 1 Y 4 EN FORMA COMBINADA Alvarez I.1*,Craig M.I.1, Rodríguez S.1, Barrandeguy M.1 y Trono K.1 1 Instituto de Virología, CICVyA. INTA. CC25. 1712. Castelar. Argentina *ialvarez@cicv.inta.gov.ar Cuando se utilizan técnicas de diagnóstico virológico basadas en sistemas libre de células como la prueba de PCR, resulta crítico demostrar que los resultados que se obtienen de su aplicación concuerdan con los resultados obtenidos con el aislamiento viral en cultivo de tejidos, ya que se ha demostrado que la detección de ácidos nucleicos en muestras en estudio no siempre tiene una correlación directa con la causa del cuadro clínico observado. El significado que puede atribuirse a los resultados obtenidos por la prueba de PCR dependerá exclusivamente de la concordancia obtenida con la prueba Gold Standard, lo que permitirá definir claramente el contexto de aplicación de la PCR y la interpretación de los resultados. Con el objetivo de disponer de una herramienta de diagnóstico combinada, rápida y sin utilizar cultivos celulares para la detección del herpes virus equino tipo 1 (HVE-1) y del herpes virus equino tipo 4 (HVE-4), causantes del aborto viral y de un cuadro respiratorio en potrillos, se estandarizó la técnica de PCR según fue descripta en Lawrence et a (1994) con algunas modificaciones, y se evaluó su performance al aplicarse para el diagnóstico de los agentes mencionados en muestras de campo procedentes de casos naturales de abortos o cuadros de tos y moco. La prueba utilizada en este trabajo es un ensayo de tipo múltiple que amplifica fragmentos complementarios al gen de la glicoproteína C del HVE-1 y al gen 76 del HVE-4, donde el tamaño diferencial de los fragmentos obtenidos permite distinguir el origen del material amplificado. Se siguieron los tres criterios básicos descriptos por Hiney and Smith (1999) para la validación de una prueba in vitro de amplificación enzimática, es decir, la evaluación de la cantidad de detección (sensibilidad), calidad de detección (especificidad) y confiabilidad de la prueba en estudio, que fueron evaluados en forma secuencial. A partir de las muestras de abortos e hisopados nasales que ingresaron al laboratorio para análisis virológico por aislamiento viral en cultivo de células desde 1996 hasta la actualidad, se seleccionaron y analizaron un total de 166 muestras. De un total de 34 hisopados nasales, 2 resultaron positivos por las 2 pruebas, ninguno de los hisopos negativos por una de las 2 pruebas resultó positivo por la otra, con un 100% de correlación de resultados. Asimismo, de un total de 132 muestras de aborto analizadas, 31 resultaron positivas por las 2 pruebas, ninguno de los abortos negativos por una las 2 pruebas resultó positivo por la otra, con un 100% de correlación de resultados. Se obtuvo una correlación total entre los resultados obtenidos por la prueba de PCR y el diagnóstico de cultivos de tejidos, considerando los 2 virus en cuestión. Para evaluar la especificidad de la técnica utilizada, se realizó la prueba de PCR utilizando como templado material genético procedente de agentes virales relacionados con el mismo cuadro patológico como el Virus de la Influenza Equina (VIE) y el Virus de la Arteritis Viral Equina (AVE). Además se utilizaron dos virus de la misma familia causantes de otros cuadros patológicos, Herpes virus Equino 2 (HVE-2) y Herpes Virus Equino 3 (HVE-3). No se observaron resultados positivos con ninguno de los cuatro templados utilizados y se confirmó que no amplifica fragmentos inespecíficos. La utilización de una determinada técnica para el diagnóstico del Herpes Virus Equino necesita un alto nivel de confiabilidad, ya que los resultados de la metodología usada podrían condicionar las decisiones referidas al manejo de la población equina bajo estudio. Los resultados obtenidos en el presente trabajo permiten otorgar un importante valor diagnóstico a la prueba de PCR para la detección combinada de Herpes Virus Equino 1 y 4 debido a que presenta total concordancia con los resultados obtenidos en el laboratorio utilizando la prueba de diagnostico convencional de aislamiento viral en cultivo de células. Además es importante recalcar que es una prueba rápida donde el resultado puede obtenerse a las 4 horas. Por esto se puede concluir que la PCR múltiple es una herramienta de diagnostico importante que posibilita tomar medidas de contención inmediatas disminuyendo el impacto económico de estas infecciones en la producción equina. Hiney, M.P. and Smith, P.R. (1998). Validation of polymerase chain reaction- based techniques for proxy detection of bacterial fish pathogens: framework, problems and possible solutions for environmental applications. Aquaculture 162:41-68 Lawrence G.L., Gilkerson J., Love D.N., Sabine M., Whalley J.M. (1994). Rapid, single-step differentiation of equid herpesviruses 1 and 4 from clinical material using the polymerase chain reaction and virus-specific primer. Journal of Virological Methods 47:59-72
Disciplines :
Veterinary medicine & animal health
Author, co-author :
Álvarez, I.
Craig, M.I.
Rodriguez, Sabrina ;  Université de Liège - ULiège > Chimie et bio-industries > Biologie cell. et moléc.
Barrandeguy, M.
Trono, K.
Language :
Spanish
Title :
Utilidad de la prueba de PCR para el diagnóstico rápido de los Herpes Virus Equinos tipo 1 y 4 en forma combinada
Publication date :
15 September 2004
Event name :
XV Reunión Científico Técnica AAVLD
Event organizer :
Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico
Event place :
Buenos Aires, Argentina
Event date :
from 15-09-2004 to 17-09-2004
Available on ORBi :
since 29 January 2013

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