Reference : Clonage du génome l'herpesvirus cyprin-3 en tant que chromosome artificiel bactérien
Dissertations and theses : Master's dissertation
Life sciences : Biochemistry, biophysics & molecular biology
Life sciences : Veterinary medicine & animal health
http://hdl.handle.net/2268/117939
Clonage du génome l'herpesvirus cyprin-3 en tant que chromosome artificiel bactérien
French
[en] Cloning of Cyprinid Herpesvirus-3 as a bacterial artificial chromosome
Fournier, Guillaume mailto [Université de Liège - ULg > > Immunologie et vaccinologie >]
5-Sep-2008
Université de Liège, ​Liege, ​​Belgium
Formation doctorale en sciences vétérinaires
vi, 44
Vanderplasschen, Alain mailto
Costes, Bérénice
Lekeux, Pierre mailto
Piette, Jacques mailto
Lieffrig, François mailto
Bureau, Fabrice mailto
[fr] herpesvirus cyprin 3 ; chromosome artificiel bactérien ; thymidine kinase
[en] Cyprinid Herpesvirus 3 ; Bacterial Artificial Chromosome ; thymidine kinase
[fr] L’herpèsvirus de la carpe koi (KHV), ou herpèsvirus cyprin 3 (CyHV-3) est l’agent responsable d’une maladie mortelle chez les carpes koi et commune. Dans cette étude, nous avons décrit le clonage du génome du KHV sous forme d’un chromosome artificiel bactérien (BAC) stable et infectieux permettant la production de souches recombinantes du KHV. Cet objectif a été atteint par l’insertion d’une cassette BAC flanquée de sites loxP au sein du gène de la thymidine kinase (TK). Cette insertion a généré un plasmide BAC stable en bactéries et a permis de régénérer des virions par transfection en cellules permissives. Ainsi, des virions excisés pour la cassette BAC et possédants un gène TK tronqué ont été produits. De la même manière, des virions révertants pour TK ont également été produits. Les souches FL BAC excisée et révertante se répliquent de manière comparable à la souche parentale in vitro. La souche révertante a induit une maladie comparable à la souche sauvage, tandis que la souche excisée a présenté un phénotype partiellement atténué. Enfin, l’utilité du BAC KHV pour la production de recombinants a été démontrée par la production d’une souche délétée pour l’ORF16 grâce au principe de recombinaison en système procaryote. L’obtention du BAC KHV est une avancée importante qui permettra l’étude des gènes viraux impliqués dans la pathogénie du KHV ainsi que la production de vaccins recombinants atténués.
[en] Koi herpesvirus (KHV) or Cyprinid herpesvirus 3 (CyHV-3) is the causative agent of a lethal disease in koi and common carp. In the present study, we described the cloning of the KHV genome as a stable and infectious BAC clone that can be used to produce KHV recombinant strains. This goal was achieved by insertion of a loxP-flanked BAC cassette into the thymidine kinase (TK) locus. This insertion led to a BAC plasmid that was stably maintained in bacteria and was able to regenerate virions when transfected into permissive cells. Reconstituted virions free of the BAC cassette but with a disrupted TK locus were produced. Similarly, virions with a wild type revertant TK sequence were produced. The FL BAC excised strain and the FL BAC revertant strain replicated comparably to the parental FL strain. The FL BAC revertant strain induced KHV in koi carp that was indistinguishable from that of the parental strain, while FL BAC excised strain exhibited a partially attenuated phenotype. Finally, the usefulness of the KHV BAC for recombinant studies was demonstrated by production of an ORF16 deleted strain using prokaryotic recombination technology. The availability of KHV BAC is an important advance that will allow the study of viral genes involved in KHV pathogenesis, as well as the production of attenuated recombinant candidate vaccines.
FRIA (fonds pour la formation à la recherche dans l'industrie et l'agriculture)
http://hdl.handle.net/2268/117939
lien vers l'article publié dans la section expérimentale : http://jvi.asm.org/content/82/10/4955.short

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